原代細胞分離培養(yǎng)是一項實驗技術(shù)，它涉及從生物體中提取組織或細胞，并將它們轉(zhuǎn)移到體外環(huán)境中進行培養(yǎng)。這些來源包括各種組織器官、外周血和胚胎等。在培養(yǎng)過程中，原代細胞的生長速度相對較慢，通常在培養(yǎng)的10代內(nèi)停止生長。因此，通常將培養(yǎng)的細胞歸類為原代細胞培養(yǎng)，這些細胞包括第1到第10代的細胞。下面讓我們一起來看看原代細胞分離的原理吧！

　　實驗原理：

　　原代細胞保持了體內(nèi)原始細胞的生物學(xué)特性，接近于體內(nèi)的生長特性。因此，它們?yōu)檠芯可矬w細胞的生長、代謝和繁殖提供了有力的工具。此外，原代細胞培養(yǎng)還為精準醫(yī)療的腫瘤診治模式和個體化精準用藥提供了支持。

　　常見的原代細胞類型包括上皮細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、角質(zhì)形成細胞、黑色素細胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞和干細胞。

　　在原代細胞分離培養(yǎng)中，首先從動物體內(nèi)取出各種組織，然后采用不同的方法，如酶消化（通常使用胰蛋白酶/膠原酶）、螯合劑（通常是EDTA）或機械分散，將組織分散成單個細胞。這些單細胞被放置在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中進行培養(yǎng)，以在離體環(huán)境中存活、生長和繁殖。這個過程稱為原代培養(yǎng)，主要包括取材、分離和培養(yǎng)三個步驟。

　　以小鼠結(jié)腸細胞為例，為了提高目標細胞的純度，原代提取的細胞通常與其他細胞混合。通過采用生物酶梯度消化和差速貼壁等方法，可以獲得纖維組織和上皮組織的高純度目標細胞。具體地，使用膠原酶I和分散酶II消化結(jié)腸組織可分散細胞間質(zhì)，而差異消化和差速貼壁方法則能有效去除成纖維細胞，最終獲得高度純凈的結(jié)腸上皮細胞。

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